产品介绍
TOP10菌株来源于MC1061菌株,是目前实验室最常用的感受态细胞之一,基因型与DH10B高度类似 (DH10B为galE15型,而TOP10为galU型)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。可用于构建克隆,蓝白斑筛选等实验。TOP10可以用来克隆复制一些毒基因。TOP10感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>1×109cfu/μg DNA。
基因型
F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139 Δ(araleu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG
储存
-80℃保存12个月。
Top10感受态 (E. coli) 和 DH5 α感受态细胞是常用的大肠杆菌细胞系,用于基因克隆、高效表达和蛋白质产量增加等研究。虽然它们都是常用的实验室细胞系,但它们在一些关键方面存在区别。下面是对它们的优缺点进行详细对比描述说明:
优点比较:
1.转化效率高:Top10 具有非常高的转化效率,适用于高效转化难以处理的 DNA 质粒。DH5α的转化效率也很高,但稍低于 Top10。我公司Top10 转化效率1×109cfu/μg DNA,远超同类产品5-10倍,比DH5a转化效率高2倍以上。
2. 稳定性好,基因突变少:Top10 能够维持较稳定的细胞生长状态,不容易产生变异。研究人员曾将同一质粒转化到Top10和DH5α这两种细胞系中,然后对转化后的细胞进行筛选和分析发现Top10 细胞系相对稳定,突变率较低。DH5α细胞系也相对稳定,但突变较 Top10 略高一些。
3. 耐药性广:Top10 细胞系具有多种抗生素抗性基因,如 tetracycline 和 chloramphenicol,方便筛选重组菌株。DH5α细胞系主要耐受 ampicillin 和 chloramphenicol,抗性种类较少一些。具体地说,Top10 细胞系常用于克隆和转染实验,因为它们携带了多个抗生素抗性基因,如 tetracycline 和 chloramphenicol。这意味着研究人员可以通过添加相应的抗生素来选择带有所需重组质粒的细胞。
4. 实验数据一致性:Top10 的稳定性和较低的突变率使得实验结果具有较高的一致性和可靠性,适合进行定量实验。DH5α感受态细胞的数据一致性相对不如 Top10。举例来说,研究人员想要比较不同组织或不同条件下特定基因的表达水平。他们使用 Top10 细胞系进行 RNA 提取,并在 qPCR 中测量目标基因的表达量。对于每个样本,他们进行了多次独立实验,并记录了每次实验的 Ct 值(荧光强度穿过门槛值的周期数)。通过计算 Ct 值的平均值和标准差,可以评估实验的数据一致性。
5. 使用验证广泛:Top10 细胞系经过多年的验证,被广泛应用于实验室研究。DH5α细胞系也是常用菌株,但相对 Top10 的应用范围更为局限。比如:Top10 细胞系广泛应用于蛋白表达和倍增等研究中。研究人员可以将目标基因克隆到融合蛋白的载体中,并将其转化到 Top10 细胞中,然后通过诱导表达获得大量的目标蛋白。这个过程已经在许多实验室和研究中得到了验证,因此研究人员可以参考他人的实验数据和方法来进行相关实验。
缺点比较:
1. 抗生素敏感性不同:Top10 对一些抗生素的选择性敏感性与 DH5α 不同,需要针对菌株的敏感性进行选择性筛选抗生素。
2. 应用的区别:Top10 适用于复杂 DNA 质粒和片段插入,例如高通量表达和蛋白质产量增加。DH5α 适合于基本的克隆、库和 DNA 扩增。
3. 价格不同:Top10 和 DH5α 的价格可能会有差异,Top10 的价格相对较高。
4. 生长速度不同:Top10 生长较慢,通常需要较长时间才能达到最佳生长状态。DH5α 生长较快,适合大规模菌液培养。
5. 可伸缩性:Top10 比较适合小规模实验和单克隆筛选,DH5α 更适合大规模实验和高通量筛选。
总结来说,虽然 Top10 和 DH5α 都是常用的大肠杆菌细胞系,但它们在转化效率、稳定性、突变率、耐药性、实验数据一致性、预期应用以及可伸缩性等方面存在一些区别。选择使用哪种细胞系应根据具体的实验目的和要求来决定,以确保实验的准确性和可靠性。