蛋白表达问题——包涵体解决方案

蛋白包涵体解决方案

1.更换感受态；尝试可以正确折叠二硫键或表达伴侣蛋白促溶的感受态细胞。

         正确折叠二硫键：Origami或者带gami简称的，形成正确的二硫键；

   伴侣蛋白进行促溶：ArcticExpress(DE3) 这个系列，低温诱导表达Cpn10和Cpn60两个伴侣蛋白促溶；

   或者SHuffle这些都是用来折叠二硫键的，二硫键异构酶Dsb，形成正确的二硫键，并具有分子伴侣的功能，帮助不含二硫键的蛋白正确折叠；

包涵体用感受态

2.更换诱导条件，尝试低温诱导。

      少数蛋白降低温度可以一定程度的解决包涵体问题，低温诱导通常配合pCold载体，或者ArcticExpress(DE3)效果更佳。

3.更换载体，更换促溶载体，分泌信号肽或者带促溶标签的载体。

      pET有些分泌蛋白，比如pET22b，N端含有一个pelB前导肽可以实现分泌表达。

      pCold系列载体，低温载体，包涵体也可以很好解决，特别推荐pCold-SUMO载体，我们常用来解决包涵体问题。

      以及很多带SUMO,MBP,GST等标签的载体都可以尝试。

4如果尝试了更换感受态细胞，载体都解决不了，就只能更换表达系统。用酵母，或者细胞表达尝试。