pCold TF大肠表达质粒
| 目录号 | 规格 | 价格 | 是否现货 |
|---|---|---|---|
| YP0076 | 1ug | 780 | 有货 |
基本信息
别名: | pColdTF |
启动子: | CSPA |
复制子: | pBR322 |
质粒分类: | 大肠系列质粒；大肠表达质粒；pCold系列质粒 |
质粒大小: | 5769bp |
质粒标签: | N-His, N-Trigger factor, N-HRV 3C, N-Thrombin, N-Factor Xa |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培养条件: | 37度 |
表达宿主: | BL21等大肠杆菌 |
培养条件: | 37℃，有氧，LB |
诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
5'测序引物: | pCold-TF-F1（CCACTTTCAACGAGCTGATG） |
| 3'测序引物: | pCold-R（GGCAGGGATCTTAGATTCTG） |
备注: | 冷启动表达质粒 |
质粒属性
质粒宿主: | 大肠杆菌 |
质粒用途: | 蛋白表达 |
片段类型: | ORF |
片段物种: | 空载体 |
原核抗性: | Amp |
真核抗性: | |
荧光标记: |
质粒简介
Takara的pCold TF载体是一种融合表达可溶性的标签"触发因子（Trigger Factor,TF）伴侣"的冷休克载体。"触发因子"（48KD）是原核核糖体相关的分子伴侣蛋白（48 kDa），有利于新表达的多肽的共翻译折叠。正因为它来源于大肠杆菌，保证了触发因子能够在大肠杆菌表达系统中高表达。 pCold TF载体由CSPA启动子及其下游的序列组成，其下游序列主要包括包括5'非翻译区（5'非编码区），翻译增强元件（TEE），His标签序列，多克隆位点（MCS）。Lac操纵子插入在CSPA启动子下游，以确保严格的表达调控。此外，HRV 3C蛋白酶，凝血酶，和Factor Xa识别位点位于“Trigger Factor”和多克隆位点（MCS）之间，以便表达的融合蛋白上将标签去除。 大多数大肠杆菌菌株都可以可以作为本载体的表达宿主。pCold TF载体提供冷休克诱导的方法高水平表达目的蛋白，再加上触发因子（伴侣）的表达来提高正确的蛋白质折叠，从而实现高效可溶性表达其他系统中难以对付的蛋白。
pColdTF质粒是利用冷休克基因CSPA启动子设计高效率蛋白质表达载体。在E.COLI启动子下游处，插入了lac操纵子，以便严格控制表达。此外，5’非翻译区（5’UTR），翻译增强元件（TEE）,His标签序列，Xa因子切割位点和多克隆位点（MCS）位于CAPS启动子的下游。当培养温度切换到低温时，大肠杆菌暂时停止生长，大部分的大肠杆菌蛋白质表达减少，但是一类称为冷休克蛋白的蛋白质被特异性诱导表达。
质粒图谱
质粒序列
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