产品简介：

      T4 DNA Ligase即T4 DNA连接酶，该酶催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的 5´ -磷酸末端和 3´ -羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平齐末端或粘性末端之间的连接，还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻。本T4 DNA Ligase由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体。浓度为5 u/ul。

用途：

     1.高效连接粘性末端和平末端

     2.T/A 克隆

     3.dsDNA 切刻修复

     4.构建高丰度克隆文库
     5.RNA 和 DNA 的连接 

单位定义：

     在37℃，20分钟内交换1 nmole 的32PPi所需要的酶量定义为一个Weiss单位。本产品酶1U(Weiss Unit)相当于200个粘性末端单位。在T4 DNA 连接酶反应缓冲液中，16℃条件下，30分钟能够使50%的经Hind III消化的λDNA 片段连接所需要的酶量为一个粘性末端单位。

反应条件：

1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液[50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM MgCl2，10 mM DTT，1 mM ATP]， 室温（16-37℃） 反应5-30min。

抑制剂和热失活：

       大于200mM的NaCl或KCl可以强烈抑制连接酶活性.

       65℃加热 10分钟或70℃加热5分钟即可失活。

质量控制：

       蓝白斑分析实验表明白斑数小于2%;过量T4 DNA Ligase 混合超螺旋质粒检测实验表明无核酸酶检出；SDS-PAGE检测重组蛋白纯度大于99%。

注意事项：
     1. 对于普通的转化大肠杆菌的操作，不必对连接产物进行纯化，连接产物可以直接用于转化。但用电转方法转化大肠杆菌时，通常宜先用DNA纯化试剂盒或酚氯仿抽提方法等纯化DNA，然后再进行电转。
    2. 普通连接反应不必进行凝胶电泳观察。如果需要对于连接产物进行凝胶电泳观察，推荐先在65℃孵育10分钟使T4 DNA Ligase失活，以避免T4 DNA Ligase和DNA结合导致的条带位置迁移(band shift)。
    3 . 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
    4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。