pTCK303

基本信息

      启动子:Ubi,35s

      复制子:pUC

      终止子:NOS

      质粒分类:植物系列，RNAi载体

      原核抗性:Kan

      真核抗性:Hyg

      克隆菌株:DH5a

      培养条件: 37度

      表达宿主:植物细胞

      质粒用途:基因沉默

      片段类型:shRNA

质粒简介

      RNA干扰（RNAi）已被证明在广泛的物种中有效。基于其原理，新一代载体包含由内含子作为环分离的反向靶序列，简化RNAi构建程序，以提高基因干扰的效率。本文构建了一种新型的基于聚合酶链式反应（PCR）的RNAi载体pTCK303，该载体具有玉米泛素启动子、2个特异性多酶位点和一个水稻内含子，用于单子叶植物基因沉默。使用该载体，只需要1个由单对引物扩增的PCR产物和2个连接反应就可以创建RNAi构建体，这缩短了转化到植物中之前的时间跨度。为了测试载体pTCK303的效率，使用水稻基因OsGAS1，并将其RNAi构建体引入水稻愈伤组织中。转基因水稻的Southern印迹分析证实了OsGAS1 RNAi结构的存在。通过用OsGAS1特异性序列探测的Northern印迹检测转基因水稻中OsGAS1水平的降低。此外，根据我们的实时PCR，RNAi转基因水稻中RNA表达水平的抑制率约为85%。因此，基于同源性依赖性基因沉默机制的RNAi载体pTCK303促进了对单子叶植物中内源基因的抑制，并被证明是一种实用而有效的沉默水稻基因的平台。

质粒图谱

质粒序列

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pTCK303.doc