Easy酵母感受态细胞制备试剂盒

       本试剂盒可以完成酵母感受态制备，酵母感受态储存，酵母转化实验。最大优点是能在-80℃长期储存酵母感受态细胞，保存6个月基本不影响其转化效率。后续酵母转化操作简单而快速，转化效率与常规的酵母转化试剂盒基本相同。如需进一步提高酵母转化效率，可选用本公司的YPD Plus，转化后复苏酵母菌，转化效率可以增加50-100%。

1.转化效率高

      可达10³-10⁵ cfu/μg DNA，可以满足酵母杂交实验，以及酵母文库构建实验。

2.可长期保存

      制备的酵母感受态细胞可-80℃长期冻存6个月以上，无需多次重复制备。

3.简单易操作

     制备过程：摇菌后10min即可完成酵母感受态细胞制备。

转化步骤：特有的单链担体鲑鱼精DNA已经混合进转化试剂里，无需每次繁琐的重复处理；即开即转，省时省力。

4.性价比高

注解：400ng  PGADT7  转化  50μl  感受态 全涂效果  

使用方法：

感受态细胞的制备：（按小体积转化制备20支感受态计，可按比例扩大）

1.活化菌种。-80 ℃保存的菌种在YPDA培养基平板上划线，30 ℃培养2-4天。

2.挑取酵母单菌落在YPDA培养基平板上划3-5 mm的短线，30 ℃培养2-4天。

3.待酵母单菌落直径长至2 mm时，把酵母细胞接种到3 mL液体YPDA培养基中，30 ℃过夜培养。

4.第二天转接到含有50 mL液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养，待OD600达到0.4-0.5，3000 rpm离心5 min，弃上清。（4 ℃保存1周内的酵母菌液，用3 mL接种50 mL YPDA培养基过夜培养）

5.用10 mL 溶液1溶液重悬沉淀，3000 rpm离心5 min，弃上清。

6.加入1 mL 溶液2溶液重悬，按50 μL分装于1.5 mL无菌冻存管，转文库按600 μL分装，感受态细胞即制备完毕，可直接用于转化。

7. 制备好的感受态细胞需缓慢冷冻后，再置于-80 ℃冰箱长期保存。将感受态细胞放入程序降温盒，或用

多层纸包裹放入泡沫盒中，先置于-80 ℃冰箱过夜后，再取出感受态置于-80 ℃冰箱，可保存一年。使用前室温融化后用于转化。

酵母质粒转化：

1.吸取350 μ L溶液3 加入50 μL感受态细胞中，加入5-10ul质粒，反复吹吸沉淀，使酵母细胞完全悬浮于预混液中。

2.30 ℃的水浴锅中热激60 min，每10 min混匀一次。对于部分菌种，延长孵育时间可提高转化效率，但不要超过3小时。

3.12,000 rpm离心15 s，弃上清。

4.（可选步骤）用1 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀，30 ℃摇床震荡培养30-60 min。12000 rpm离心15 s，弃上清。

5.加入400 μL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体，涂筛选培养基平板，30 ℃培养2-4天。

酵母文库转化：（需用15-50 mL离心管）

1.将2592 μL预混液加入到600 μL感受态细胞中，震荡使感受态细胞充分悬浮于预混液中。

2.30 ℃的水浴锅中热激90 min，每10 min混匀一次。对于部分菌种，延长孵育时间可提高转化效率，但不要超过3小时。

3.3000 rpm离心5 min，弃上清。

4.（可选步骤）用3 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀，30 ℃摇床震荡培养90 min，3000 rpm离心5 min，弃上清。

5.加入15 mL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体，涂筛选培养基平板，30 ℃培养2-4天。

注意事项：

1. 转化全程要求无菌操作。

2. 为了保证转化效率，务必缓慢冻存感受态，感受态不宜直接用液氮冻存。

3. 增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。