Easy酵母感受态细胞制备试剂盒
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目录号 | 产品名称 | 规格 | 价格 |
YA6011-1 | Easy酵母感受态细胞制备试剂盒 | 50T(50支) | 498 |
YA6011-2 | 100T(100支) | 798 | |
YA6011-3 | 200T(200支) | 1298 |
本试剂盒可以完成酵母感受态制备,酵母感受态储存,酵母转化实验。最大优点是能在-80℃长期储存酵母感受态细胞,保存6个月基本不影响其转化效率。后续酵母转化操作简单而快速,转化效率与常规的酵母转化试剂盒基本相同。如需进一步提高酵母转化效率,可选用本公司的YPD Plus,转化后复苏酵母菌,转化效率可以增加50-100%。
1.转化效率高
可达103-105 cfu/μg DNA,可以满足酵母杂交实验,以及酵母文库构建实验。
2.可长期保存
制备的酵母感受态细胞可-80℃长期冻存6个月以上,无需多次重复制备。
3.简单易操作
制备过程:摇菌后10min即可完成酵母感受态细胞制备。
转化步骤:特有的单链担体鲑鱼精DNA已经混合进转化试剂里,无需每次繁琐的重复处理;即开即转,省时省力。
4.性价比高
注解:400ng PGADT7 转化 50μl 感受态 全涂效果
使用方法:
感受态细胞的制备:(按小体积转化制备20支感受态计,可按比例扩大)
1.活化菌种。-80 ℃保存的菌种在YPDA培养基平板上划线,30 ℃培养2-4天。
2.挑取酵母单菌落在YPDA培养基平板上划3-5 mm的短线,30 ℃培养2-4天。
3.待酵母单菌落直径长至2 mm时,把酵母细胞接种到3 mL液体YPDA培养基中,30 ℃过夜培养。
4.第二天转接到含有50 mL液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养,待OD600达到0.4-0.5,3000 rpm离心5 min,弃上清。(4 ℃保存1周内的酵母菌液,用3 mL接种50 mL YPDA培养基过夜培养)
5.用10 mL 溶液1溶液重悬沉淀,3000 rpm离心5 min,弃上清。
6.加入1 mL 溶液2溶液重悬,按50 μL分装于1.5 mL无菌冻存管,转文库按600 μL分装,感受态细胞即制备完毕,可直接用于转化。
7. 制备好的感受态细胞需缓慢冷冻后,再置于-80 ℃冰箱长期保存。将感受态细胞放入程序降温盒,或用
多层纸包裹放入泡沫盒中,先置于-80 ℃冰箱过夜后,再取出感受态置于-80 ℃冰箱,可保存一年。使用前室温融化后用于转化。
酵母质粒转化:
1.吸取350 μ L溶液3 加入50 μL感受态细胞中,加入5-10ul质粒,反复吹吸沉淀,使酵母细胞完全悬浮于预混液中。
2.30 ℃的水浴锅中热激60 min,每10 min混匀一次。对于部分菌种,延长孵育时间可提高转化效率,但不要超过3小时。
3.12,000 rpm离心15 s,弃上清。
4.(可选步骤)用1 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀,30 ℃摇床震荡培养30-60 min。12000 rpm离心15 s,弃上清。
5.加入400 μL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体,涂筛选培养基平板,30 ℃培养2-4天。
酵母文库转化:(需用15-50 mL离心管)
1.将2592 μL预混液加入到600 μL感受态细胞中,震荡使感受态细胞充分悬浮于预混液中。
2.30 ℃的水浴锅中热激90 min,每10 min混匀一次。对于部分菌种,延长孵育时间可提高转化效率,但不要超过3小时。
3.3000 rpm离心5 min,弃上清。
4.(可选步骤)用3 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀,30 ℃摇床震荡培养90 min,3000 rpm离心5 min,弃上清。
5.加入15 mL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体,涂筛选培养基平板,30 ℃培养2-4天。
注意事项:
1. 转化全程要求无菌操作。
2. 为了保证转化效率,务必缓慢冻存感受态,感受态不宜直接用液氮冻存。
3. 增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。