Easy酵母阳性克隆快速鉴定试剂盒
YA6012-1 | Easy酵母阳性克隆快速鉴定试剂盒 | 20 次 | 198 |
YA6012-2 | 200 次 | 698 |
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产品说明:
本产品用于酵母单杂双杂筛库系统,可以快速地扩增、分选并分析文库筛选所获得的阳性克隆中prey/文库质粒的cDNA插入片段。
PCR Mix含Taq、dNTP、PCR buffer和水,只需要补充模板5 μL,引物混合物1 μL即可用于PCR扩增。可供50 μL PCR体系进行200次扩增实验。3AD & 5AD引物混合物可用于pGADT7、pGADT7-Rec、pGADT7-Rec2系列载体构建的AD文库。每50 μL体系加入1 μL引物混合物。亦可根据需要加入自备引物。
使用方法:
菌落样品
1.准备PCR预混液:根据检测克隆数,等比例扩大配制体积。
2.吸取5 μL菌落裂解液I加入PCR管中(如处理样品量大,建议用8联排PCR管)。
3.用无菌牙签或者枪头刮取适量直径1-2 mm的酵母菌落悬浮在菌落裂解液中。
4.吹打或者震荡混匀后,静置5 min,即为裂解产物。
5.(可选步骤)于-20 ℃冷冻5 min或置于-80 ℃冰箱速冻10 s。
6.在裂解产物中加入45 μL PCR预混液(已加引物),直接PCR扩增。
注意:
1. 先取3-5个克隆进行预实验后再进行批量实验。
2. 培养时间短的样品,无需冷冻。冷冻完的样品可直接加入PCR预混液,解冻与否均可。
3. 团状酵母菌落很难裂解,吹打或者震荡混匀尤为重要。
4. 如预实验失败,将上述第4步得到的裂解产物置于PCR仪98 ℃保温5 min后,用掌上离心机(8联排),离心1min 后取上清加入45 μL PCR预混液中,可有效提高PCR效率。
PCR反应体系:
PCR反应条件:
注意事项:
1. 菌落PCR前,先刮取部分菌落保存,可以有效避免样品污染和丢失。
2. 新鲜菌落的PCR成功率接近100%。如生长期较长的菌落,请先进行预实验。
3. 如部分样品经过多次PCR都无法检测成功。建议小摇之后,用快速酵母质粒提取试剂盒提取,再进行PCR扩增。